1．準備各種液體
(1)洗滌液2個30mm培養皿(Falcon 3001)或4個孔的培養(Nuncon：)， 加入0．8～2ml 10％血清Eade’s培養液。
(2)受精液(insemination medium， IM) 4孔：Nunclon培養皿中每孔加入0．8ml或製成數個10％d的10％血清Earle’s液於(falcon 3002)平皿中微滴， 表面用石蠟油覆蓋。
(3)生長液(growth medium， GM) 與受精液同樣配製。 各種培養液製備完成後， 都應放入5％c02， 370C培養箱內平衡， 以保證pH及滲透壓穩定。
2．收集卵母細胞
(1)用10ml試管(Falcon 2001)收集卵細胞迅速將卵泡液倒入培養皿內(I~alcon3003)， 置實體解剖鏡下(15×)， 先用肉眼觀察可看到一個灰色透亮的粘液團塊， 被稱為卵一冠一丘複合物(OCCC：)， 再在解剖鏡下觀察， 確認是否有卵母細胞存在。
(2)根據OCCC的形態學如顆粒細胞大小及分散度等判斷卵細胞成熟度。
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O級：無卵丘結構， 可見放射冠或第一極體。
工級：很薄的卵丘和(或)放射冠圍繞在透明帶周圍， 見第一極體
Ⅱ級：中等大小的卵丘結構， 細胞鬆散， 放射冠界限清晰。
Ⅲ級：卵丘結構大而鬆散， 放射冠薄分界不清。
(3)將收集到的卵一冠一丘複合體OCCC放入洗滌液內，
沖洗兩次，
去除周圍的紅細胞，
並轉移至IM液中，
置5％C02及370C培養箱內培養4～6小時，
使卵母細胞進一步成熟。
